參烏膠囊對擬亨廷頓病大鼠行為及腦內神經營養因子的影響

摘要:目的 　 觀察擬亨廷頓病模型大鼠學習記憶改變情況 ,腦黑質、海馬部位腦源性神經營養因子
(BDNF)和膠質細胞源性神經營養因子(GDNF)的改變情況及參烏膠囊對其的干預作用。方法 　用
線粒體呼吸鏈復合體 Ⅱ/ Ⅲ抑制劑 ——— 3 - 硝基丙酸(32nitropropionic acid ,32NPA) 20 mg/ kg對 SD 大
鼠隔日腹腔注射連續造模20 d ,建立 HD大鼠模型。造模的同時 ,用藥組大鼠給予參烏膠囊連續灌
胃25 d。陽性對照藥組自造模當日起給予氟**醇。應用Morris水迷宮及避暗實驗檢測大鼠學習
記憶能力。應用**組織化學染色法檢測大鼠海馬 CA1及 CA4區BDNF、 GDNF的細胞數量及細胞
面積。結果 　 Morris水迷宮實驗中 ,模型大鼠的游出時間及游出距離較對照組明顯延長 ,參烏膠囊
用藥組可以顯著縮短大鼠的游出時間及距離。避暗實驗中 ,參烏膠囊用藥組大鼠較模型大鼠進入
暗箱的潛伏期分別顯著性延長56169 s和54124 s。在海馬CA1及CA4區 ,模型組動物BDNF、 GDNF
陽性細胞的表達明顯較正常對照組細胞數減少 ,陽性細胞總面積減少。而 962 中劑量組對于此區
BDNF、 GDNF陽性細胞的表達明顯具增強作用( P < 0101) 。結論 　參烏膠囊可以明顯增強動物學
習記憶能力 ,增強32NPA模型大鼠海馬處BDNF及 GDNF的表達。
關鍵詞:3 - 硝基丙酸;亨廷頓病;神經營養因子;大鼠
中圖分類號:R285. 5
1 　材料與方法
1. 1 　材料
1.1. 1 　動物:雄性 SD 大鼠 ,體重 230～260 g ,SPF
級 ,購自中國藥品生物制品檢定所動物繁育中心(京
動許字D017號) 。
1. 1. 2　試劑:3 - 硝基丙酸(3 - nitropropionic acid ,32
NPA)為 Sigma 公司產品。甲醛、異戊烷、 30 %過氧化
氫(H2O2) 、二甲苯、中性樹膠均購自北京化學試劑公
司。BDNF、 GDNF抗體、二抗 Ra IgG/Mo IgG、三抗 S
- A/ HRP、封閉用羊血清、 DAB購自北京中山生物技
術有限公司。
1. 1. 3 　**:參烏膠囊由人參、制首烏、石菖蒲等 6
味中藥組成 ,由我室自行研制、委托北京第四制藥廠
加工 ,批號 980515 ,每克干粉含生藥 6125 g。實驗
中 ,采用干粉劑量 ,溶于水 ,制成溶液應用。氟**
醇 ,北京市雙橋制藥廠生產 ,批號 950202 ,京衛藥準
字(86)第106號。
1. 1. 4 　儀器:Noesis Vision 公司 VISILOG5. 0 圖象分
析系統 ,恒溫冷凍切片機(英國山盾公司 ASE - 620
院**研究所。
1. 2 　方法
1. 2. 1 　分組及給藥:雄性 SD 大鼠隨機分組。正常
對照組 ,蒸餾水灌胃5 d后 ,隔日腹腔注射與模型組
等劑量的生理鹽水; 模型組 ,32NPA 20 mg/ kg 腹腔
注射 ,隔日 1 次 ,共造模 20 d ;參烏膠囊小、中、大劑
量組分別給予參烏膠囊 0145 g/ kg、 019 g/ kg 和 118
g/ kg灌胃5 d后腹腔注射 32NPA 造模 ,再連續灌服
參烏膠囊20 d ;陽性對照藥組:造模當天開始給予氟
**醇011μg/ kg體重 ,后隔日遞增011μg/ kg體重 ,
直至1μg/ kg體重。
1. 2. 2　 32NPA致神經退行性**大鼠模型的建立:
每100 mg 32NPA溶于1 mL 無水乙醇中 ,再用 019 %
無菌生理鹽水稀釋至 4 g/ L ,調節其 pH為 7. 4。模
型組動物隔天腹腔注射 32NPA 20 mg/ kg ,共造模 20
d。
1. 2. 3 　大鼠 Morris 水迷宮實驗:參照 Morris R[1 ]
及
洪岸[2 ]
,匡培梓[3 ]
等的方法進行實驗。
大鼠每天訓練2次 ,共訓練4 d ,第1天訓練時 ,
型) ,Morris水迷宮箱、避暗箱均購自中國醫學科學所選入池位置為站臺所對及相鄰象限 ,將大鼠于象